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細(xì)胞分離液的配置和使用的步驟來了解一下
點擊次數(shù):3935 更新時間:2019-07-25
   細(xì)胞分離液是一種經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮處理過的硅膠顆粒,經(jīng)過高速離心后可形成連續(xù)密度梯度,由于Percoll擴(kuò)散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。分離液采用預(yù)先形成的密度梯度時可在低離心力(200~1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達(dá)到滿意的細(xì)胞分離結(jié)果。此外,分離液不穿透生物膜,對細(xì)胞無毒害,因此廣泛用于分離細(xì)胞、亞細(xì)胞成分、細(xì)菌及病毒,還可將受損細(xì)胞及其碎片與完好的活細(xì)胞分離。常用于分離和傳話植物原生質(zhì)體、核、葉綠體、和線粒體。
  細(xì)胞分離液的配置與使用
  1、不同濃度(密度)分離液的制備:先用9份分離液與1份8.5%NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85%NaCl或0.15MPBS)稀釋到所需濃度。
  2、不連續(xù)密度梯度層的制備:先將試管壁用牛血清濕潤,除去多余血清,這種預(yù)處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下,使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時相鄰兩層比重相差不大時,可將液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
  3、裝樣:樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異,一般加樣體積不宜過大,細(xì)胞濃度也不可過高,否則會影響細(xì)胞的分離和回收。
  4、離心:一般采用離心力為400g,時間20~25min。由于多層之間密度差別不大,因此離心機(jī)加速、降速時要慢,要平穩(wěn)。
  5、取樣:當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時,可逐層去除液后收集界面部位的細(xì)胞;有時大部分細(xì)胞位于層中,則需要逐層收集。收獲含有液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。
  細(xì)胞分離液的優(yōu)點
  滲透性低、不穿透細(xì)胞、密度高、無毒害,是目前較理想的介質(zhì)。密度梯度離心已被多次成功地用于動物細(xì)胞及其細(xì)胞器的分離,純化了包括人血液細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、紅血球細(xì)胞、白血球細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞等在內(nèi)的十余種動物細(xì)胞。

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