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貨號：YJS2203 規(guī)格：50管/24樣
多酚氧化酶檢測試劑盒(PPO)說明書
可見分光光度法
產(chǎn)品簡介：
PPO主要存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。
PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌，后者在525nm有特征光吸收。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體，60ml×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體，40ml×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體，10ml×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體，20ml×1瓶，4℃保存
操作步驟：
1、收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬細菌或細胞加入400μl提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
2、稱取約0.2g組織，加入1ml提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
二、測定操作表：
試劑名稱（μl） | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 600 | 600 |
試劑二 | 150 | 150 |
樣本 | 150 |
|
煮沸的樣本 |
| 150 |
37℃(哺乳動物)或25℃（其它物種）中準(zhǔn)確水浴10min后，迅速放入冰浴中冷卻 | ||
試劑三 | 300 | 300 |
充分混勻，5000g，常溫離心10min，收集上清，用蒸餾水調(diào)零，525nm處檢測測定管和對照管吸光度。
注意:每個測定管需要設(shè)置一個對照管,可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行1min沸水浴處理
PPO活性計算：
1、血清、血漿或果汁PPO活性計算
單位定義：每分鐘每毫升樣品在每毫升反應(yīng)體系中使525nm吸光值變化0.01為一個酶活力單位
PPO（U/mL）=（A測定-A對照）×反應(yīng)總體積÷(V液*×V樣*÷V樣總*) ÷0.01÷反應(yīng)時間
=80×（A測定-A對照）÷V液*
2、組織中PPO活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每分鐘每mg組織蛋白在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。
PPO（U/mg prot）=反應(yīng)總體積（1200μl）÷樣本體積（150μl）÷反應(yīng)時間（10min）÷0.01×（A測定-A對照）÷蛋白濃度（mg/ml）=80×（A測定-A對照）÷蛋白濃度（mg/ml）
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每分鐘每g組織蛋白在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。
PPO（U/g 鮮重）=反應(yīng)總體積（1200μl）÷樣本體積（150μl）÷反應(yīng)時間（10min）÷0.01×（A測定-A對照）÷樣本鮮重（g/ml）=80×（A測定-A對照）÷樣本鮮重（g/ml）
3、按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每分鐘每1萬個細菌或細胞在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。
PPO（U/104 cell）=反應(yīng)總體積（1200μl）÷樣本體積（150μl）÷反應(yīng)時間（10min）÷0.01×（A測定-A對照）÷細菌或細胞密度（104/ml）=80×（A測定-A對照）÷500*
*V液：加入的血清、血漿或果汁的體積
*V樣：加入樣本體積
*V樣總：加入提取液體積
*500：細菌或細胞總數(shù)500萬
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