美國程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率,由于美國程序降溫盒內(nèi)存在100%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯,因此美國程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇。
美國程序降溫盒的使用經(jīng)驗:雖然梯度降溫的起始點是室溫20°左右,但是凍存液里面的DMSO對細(xì)胞有毒性,尤其是室溫的時候,所以凍存盒和凍存液先預(yù)放至4°,等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放入凍存盒后,立刻轉(zhuǎn)移到-80度冰箱,第二天再轉(zhuǎn)移到液氮。凍存盒中的異丙醇應(yīng)使用5~7此后更換一次,而且保證液體量不低于250ml刻度線,否則降溫效果會受到影響。異丙醇:無色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹?、有毒液體,熔點是-87.9度。請注意其可燃性。
美國程序降溫盒經(jīng)驗1:凍存盒外表面有刻度的吧,異丙醇液面要高于zui底線。
美國程序降溫盒肯定是先放在室溫,然后放進去細(xì)胞,置于-80,利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫啊。
美國程序降溫盒經(jīng)驗2:實驗室凍存盒平時放4度,需要凍細(xì)胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮,貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移,不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?,F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的,很方便,效果也不錯的。
美國程序降溫盒經(jīng)驗3:異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉(zhuǎn)移到液氮,效果很不錯。